Celer AFLA B1 test ELISA do oznaczania aflatoksyny B1 96 oznaczeń

Celer AFLA B1 - test ELISA do oznaczania aflatoksyny B1, 96 oznaczeń

Celer AFLA B1 to konkurencyjny test immunoenzymatyczny ELISA przeznaczony do ilościowego oznaczania aflatoksyny B1 w produktach spożywczych, paszach i surowcach rolnych. Zestaw umożliwia wykonanie 96 oznaczeń, wliczając dołki przeznaczone na standardy krzywej kalibracyjnej.

Test znajduje zastosowanie w laboratoriach kontroli żywności i pasz, zakładach produkcyjnych oraz jednostkach prowadzących monitoring mikotoksyn. Procedura oznaczenia po przygotowaniu ekstraktów obejmuje 10 minut inkubacji konkurencyjnej oraz 5 minut rozwijania barwy.

Kluczowe cechy i parametry techniczne

Zastosowanie i rodzaje próbek

Test może być stosowany do oznaczania aflatoksyny B1 w odpowiednio przygotowanych próbkach takich jak:

• kukurydza, sorgo i ryż brązowy,
• kukurydza o wysokiej wilgotności,
• kiszonki i mieszanki paszowe,
• pasze i DDGS,
• mączka z glutenu kukurydzianego,
• orzechy laskowe, pistacje, orzeszki ziemne i migdały,
• mączka z orzeszków ziemnych,
• suszone owoce, w tym rodzynki i figi,
• nasiona bawełny,
• soja i śruta sojowa.

Dobór procedury ekstrakcji zależy od badanej matrycy. Instrukcja producenta przewiduje zastosowanie wodnych roztworów metanolu o różnych stężeniach oraz, w przypadku części próbek, dodatku chlorku sodu.

Zasada działania testu

Do studzienek wstępnego mieszania dodawany jest koniugat enzymatyczny aflatoksyny oraz standard albo ekstrakt próbki. Mieszanina jest następnie przenoszona do studzienek opłaszczonych przeciwciałami przeciwko aflatoksynie.

W czasie inkubacji aflatoksyna B1 znajdująca się w próbce konkuruje z aflatoksyną znakowaną enzymem o miejsca wiążące przeciwciał. Po usunięciu niezwiązanych składników i przemyciu płytki dodawany jest substrat chromogenny.

Reakcja powoduje powstanie niebieskiego zabarwienia, które po dodaniu roztworu zatrzymującego zmienia się na żółte. Absorbancję mierzy się przy długości fali 450 nm. Intensywność barwy jest odwrotnie proporcjonalna do stężenia aflatoksyny B1 w próbce.

Zawartość zestawu

• płytka do wstępnego mieszania: 96 nieopłaszczonych studzienek,
• płytka testowa: 96 studzienek opłaszczonych przeciwciałami przeciwko aflatoksynie,
• 5 standardów aflatoksyny B1 po 1,5 ml: 0, 1, 5, 20 i 40 ppb,
• koniugat enzymatyczny: 14 ml,
• bufor płuczący 10×: 50 ml,
• roztwór wywołujący barwę: 14 ml,
• roztwór zatrzymujący reakcję: 8 ml.

Paski płytki można rozdzielać, dzięki czemu liczba wykorzystywanych studzienek może zostać dostosowana do liczby próbek w danej serii.

Materiały wymagane, ale niedostarczane

• woda destylowana lub dejonizowana,
• metanol i roztwory ekstrakcyjne właściwe dla badanej matrycy,
• chlorek sodu, jeśli wymaga go procedura ekstrakcji,
• waga laboratoryjna,
• młynek lub homogenizator,
• wytrząsarka, opcjonalnie,
• bibuła filtracyjna, np. Whatman nr 1,
• wirówka, opcjonalnie dla nasion bawełny,
• mikropipety jedno- i wielokanałowe z końcówkami,
• czytnik mikropłytek ELISA z filtrem 450 nm.

Przebieg oznaczenia ELISA

1. Zaplanować rozmieszczenie standardów i próbek na płytce testowej oraz przygotować odpowiadającą liczbę studzienek do wstępnego mieszania.
2. Dodać po 100 µl koniugatu enzymatycznego do studzienek wstępnego mieszania.
3. Dodać po 50 µl odpowiedniego standardu lub ekstraktu próbki.
4. Wymieszać przez trzykrotne pipetowanie i natychmiast przenieść po 100 µl do studzienek opłaszczonych przeciwciałami.
5. Inkubować przez 10 minut w temperaturze pokojowej, bez wytrząsania.
6. Usunąć ciecz i trzykrotnie przemyć studzienki rozcieńczonym buforem płuczącym.
7. Dodać po 100 µl roztworu wywołującego barwę.
8. Inkubować przez 5 minut w temperaturze pokojowej, chroniąc płytkę przed bezpośrednim światłem.
9. Dodać po 50 µl roztworu zatrzymującego reakcję.
10. Zmierzyć absorbancję przy 450 nm w ciągu 15 minut.

Producent zaleca wykonywanie maksymalnie 48 oznaczeń w jednej serii, wliczając standardy. Jeśli nie jest używana pipeta wielokanałowa, zalecana maksymalna wielkość serii wynosi 16 oznaczeń.

Obliczanie i ocena wyników

Dla każdego standardu i próbki oblicza się wartość względną:

B/B0 [%] = absorbancja standardu lub próbki / absorbancja standardu zerowego × 100

Na podstawie wartości B/B0 standardów i odpowiadających im stężeń aflatoksyny B1 przygotowuje się krzywą kalibracyjną. Stężenie w próbce wyznacza się przez interpolację. Jeżeli ekstrakt został dodatkowo rozcieńczony pięciokrotnie, odczytany wynik należy pomnożyć przez 5.

Parametry kontroli poprawności oznaczenia według instrukcji:

• absorbancja standardu zerowego B0: powyżej 0,7 OD przy 450 nm,
• punkt B/B0 = 50%: w zakresie 1,6–8 ppb.

Wyniki niespełniające parametrów kontroli serii nie powinny być uznawane za wiarygodne. Należy wówczas sprawdzić sposób pipetowania, płukania, temperaturę, czas inkubacji, długość fali oraz termin ważności odczynników.

Specyficzność i ograniczenia

Przeciwciała testu wykazują następującą reaktywność krzyżową:

• aflatoksyna B1: 100%,
• aflatoksyna B2: 5 ± 1%,
• aflatoksyna G1: 19 ± 1%,
• aflatoksyna G2: poniżej 1%.

Oznacza to, że test jest ukierunkowany na aflatoksynę B1, ale obecność innych aflatoksyn, szczególnie G1, może wpływać na uzyskany wynik. Wynik należy interpretować z uwzględnieniem matrycy, zastosowanej procedury ekstrakcji i możliwych interferencji.

Test ma charakter metody przesiewowej. Próbki ocenione jako dodatnie powinny zostać ponownie przebadane odpowiednią metodą potwierdzającą. Wyniku nie należy interpretować poza zakresem zwalidowanej matrycy i procedury.

Przechowywanie i bezpieczne użytkowanie

• Przechowywać zestaw w temperaturze 2–8°C.
• Nie zamrażać odczynników.
• Przed użyciem pozostawić wszystkie komponenty przez co najmniej godzinę w temperaturze pokojowej.
• Nie otwierać opakowania płytki przed osiągnięciem przez nią temperatury pokojowej.
• Niewykorzystane paski przechowywać w szczelnie zamkniętej torebce ze środkiem osuszającym.
• Nie mieszać komponentów pochodzących z różnych partii zestawu.
• Roztwór zatrzymujący zawiera kwas siarkowy i wymaga zachowania odpowiednich środków ochrony.
• Ekstrakcja z użyciem metanolu powinna być prowadzona zgodnie z kartą charakterystyki oraz procedurami bezpieczeństwa laboratorium.

FAQ - najczęściej zadawane pytania

Co oznacza „96 det.” w nazwie produktu?

Skrót „det.” oznacza determinations, czyli oznaczenia. Zestaw zawiera materiały do wykonania 96 oznaczeń, wliczając studzienki wykorzystane do przygotowania krzywej standardowej.

Czy Celer AFLA B1 oznacza sumę aflatoksyn?

Nie. Test jest przeznaczony do ilościowego oznaczania aflatoksyny B1. Inne aflatoksyny wykazują jedynie określoną reaktywność krzyżową z zastosowanymi przeciwciałami.

Jaka jest granica wykrywalności testu?

Deklarowana granica wykrywalności wynosi 1 ppb. Rzeczywista przydatność wyniku zależy również od rodzaju matrycy, reprezentatywności próbki i prawidłowego wykonania ekstrakcji.

Czy wynik można odczytać bez czytnika ELISA?

Nie. Ilościowa ocena wymaga pomiaru absorbancji przy długości fali 450 nm za pomocą manualnego lub automatycznego czytnika mikropłytek.

Czy pełne badanie trwa 15 minut?

Piętnaście minut obejmuje właściwą procedurę immunoenzymatyczną: 10 minut pierwszej inkubacji i 5 minut rozwijania barwy. Czas rozdrabniania, ekstrakcji, filtracji i przygotowania odczynników należy doliczyć osobno.

Czy test może pracować automatycznie?

Tak. Producent wskazuje, że oznaczenie zostało zwalidowane do pracy z automatycznym analizatorem ELISA The Bolt™. Możliwe jest również wykonanie manualne z użyciem czytnika 450 nm.

Potrzebujesz pomocy w dobraniu testu do oznaczania aflatoksyn lub właściwej procedury przygotowania próbki? Informacje znajdziesz w bazie wiedzy BestLabs:

Jeśli potrzebujesz zestawu o innej czułości, liczbie oznaczeń lub zakresie matryc, skontaktuj się ze specjalistą BestLabs: