Celer® AFLA M1 500 Aflatoxin M1 test ELISA 96 studzienek - SVHC

Celer AFLA M1 500 - test ELISA do oznaczania aflatoksyny M1, 96 studzienek - SVHC

Celer AFLA M1 500 to konkurencyjny test immunoenzymatyczny ELISA przeznaczony do ilościowego oznaczania aflatoksyny M1 w mleku surowym i mleku w proszku. Zestaw wykorzystuje płytkę zawierającą 96 studzienek i obejmuje materiały wystarczające do wykonania 96 oznaczeń, wliczając standardy krzywej kalibracyjnej.

Wariant „500” został wyposażony w standardy obejmujące zakres od 0 do 500 ng/l. Mleko surowe może być analizowane bez odtłuszczania i dodatkowej ekstrakcji, natomiast mleko w proszku wymaga odtworzenia w wodzie zgodnie z instrukcją producenta.

Kluczowe cechy i parametry techniczne

Zastosowanie

Celer AFLA M1 500 jest przeznaczony do laboratoryjnego monitorowania zawartości aflatoksyny M1 w:

• surowym mleku,
• mleku w proszku po jego odtworzeniu.

Test może być stosowany przez mleczarnie, laboratoria zakładowe, jednostki kontroli żywności oraz laboratoria badawcze prowadzące ilościową analizę próbek mleka. Umożliwia przesiewową ocenę surowca przed przyjęciem do produkcji oraz kontrolę produktu na kolejnych etapach procesu technologicznego.

Wariant M1 500 jest przeznaczony do pracy przy wyższych poziomach stężeń niż bardziej czułe testy AFLA M1 o niższych granicach wykrywalności. Dobór zestawu powinien uwzględniać wymagany poziom decyzyjny oraz aktualne przepisy obowiązujące dla danego rynku.

Zasada działania testu

Studzienki płytki są opłaszczone przeciwciałami skierowanymi przeciwko aflatoksynie M1. Standardy i próbki dodaje się bezpośrednio do odpowiednich studzienek.

Podczas pierwszej inkubacji aflatoksyna M1 obecna w próbce wiąże się z przeciwciałami znajdującymi się na powierzchni studzienki. Po wypłukaniu niezwiązanych składników dodawany jest znakowany enzymem koniugat aflatoksyny. Koniugat zajmuje pozostałe wolne miejsca wiążące przeciwciał.

Po ponownym płukaniu dodaje się substrat chromogenny. Powstające niebieskie zabarwienie po zatrzymaniu reakcji zmienia kolor na żółty. Absorbancję mierzy się przy długości fali 450 nm.

Intensywność zabarwienia jest odwrotnie proporcjonalna do stężenia aflatoksyny M1 w próbce. Im większe stężenie AFM1, tym niższa absorbancja.

Zawartość zestawu

• płytka ELISA zawierająca 96 studzienek opłaszczonych przeciwciałami przeciwko aflatoksynie M1,
• 5 standardów aflatoksyny M1 po 1,5 ml: 0, 25, 50, 200 i 500 ng/l,
• koniugat enzymatyczny: 14 ml,
• bufor płuczący 20×: 50 ml,
• roztwór wywołujący barwę: 14 ml,
• roztwór zatrzymujący reakcję: 8 ml.

Studzienki umieszczone są na odłamywanych paskach, dlatego możliwe jest wykorzystywanie tylko części płytki i przechowywanie pozostałych pasków do kolejnej serii oznaczeń.

Materiały wymagane, ale niedostarczane

• Milk Diluent, numer katalogowy HU0040101, potrzebny między innymi do rozcieńczania próbek przekraczających zakres krzywej,
• woda destylowana lub dejonizowana,
• waga laboratoryjna do przygotowania mleka w proszku,
• mikropipeta o zakresie 50–200 µl z odpowiednimi końcówkami,
• pipeta wielokanałowa 50–250 µl przy pracy z więcej niż trzema paskami,
• czytnik mikropłytek ELISA z filtrem 450 nm,
• materiały do ręcznego albo automatycznego płukania studzienek.

Przygotowanie próbek

Mleko surowe

1. Doprowadzić próbkę do temperatury pokojowej.
2. Delikatnie wymieszać, zapewniając jednorodność materiału.
3. Analizować bezpośrednio, bez odtłuszczania.

Producent zaleca zbadanie mleka w ciągu 24 godzin od udoju. Jeżeli nie jest to możliwe, sposób zabezpieczenia i przechowywania próbki powinien wynikać z instrukcji producenta oraz zatwierdzonej procedury laboratorium.

Próbki zawierające powyżej 500 ng/l można rozcieńczyć czterokrotnie, w proporcji 1 + 3, przy użyciu Milk Diluent i oznaczyć ponownie. Uzyskany wynik należy pomnożyć przez współczynnik rozcieńczenia.

Mleko w proszku

1. Odważyć 10 g mleka w proszku.
2. Uzupełnić wodą destylowaną do objętości 100 ml.
3. W celu ułatwienia rozpuszczania można zastosować wodę o temperaturze 37–40°C.
4. Mieszać do całkowitego rozpuszczenia proszku.
5. Przy obliczaniu wyniku zastosować współczynnik rozcieńczenia równy 10.

Przebieg oznaczenia ELISA

1. Zaplanować rozmieszczenie standardów i próbek na płytce.
2. Dodać po 100 µl każdego standardu lub próbki do odpowiednich studzienek.
3. Delikatnie wymieszać płytkę ruchem obrotowym i inkubować przez 10 minut w temperaturze pokojowej.
4. Usunąć ciecz i trzykrotnie przemyć studzienki rozcieńczonym buforem płuczącym.
5. Dodać po 100 µl koniugatu enzymatycznego.
6. Delikatnie wymieszać i inkubować przez 5 minut.
7. Ponownie trzykrotnie przemyć studzienki.
8. Dodać po 100 µl roztworu wywołującego barwę.
9. Inkubować przez 5 minut w temperaturze pokojowej, chroniąc płytkę przed bezpośrednim światłem.
10. Dodać po 50 µl roztworu zatrzymującego reakcję.
11. Zmierzyć absorbancję przy 450 nm w ciągu 15 minut od zatrzymania reakcji.

Instrukcja zaleca wykonywanie maksymalnie 24 oznaczeń w jednej serii, wliczając standardy. Ograniczenie pomaga zachować wymagane czasy dozowania i inkubacji.  

Przechowywanie

• Przechowywać wszystkie komponenty w temperaturze 2–8°C.
• Nie zamrażać zestawu.
• Przed użyciem pozostawić odczynniki przez około 2 godziny w temperaturze pokojowej.
• Nie otwierać opakowania płytki przed osiągnięciem przez nią temperatury pokojowej.
• Niewykorzystane paski zamknąć w oryginalnej torebce ze środkiem osuszającym.
• Po zakończeniu pracy odczynniki niezwłocznie umieścić ponownie w temperaturze 2–8°C.
• Nie mieszać komponentów pochodzących z różnych partii.

Ograniczenia metody

Test należy stosować wyłącznie do matryc i według procedur wskazanych przez producenta. Wynik ujemny odnosi się do przebadanej próbki oraz deklarowanej granicy wykrywalności.

Próbki ocenione jako dodatnie powinny zostać zweryfikowane odpowiednią metodą potwierdzającą. Wyniki należy interpretować z uwzględnieniem aktualnych limitów prawnych obowiązujących dla danego rodzaju produktu i rynku docelowego.

FAQ - najczęściej zadawane pytania

Co oznacza liczba 500 w nazwie Celer AFLA M1 500?

Liczba 500 odnosi się do górnego standardu krzywej kalibracyjnej wynoszącego 500 ng/l aflatoksyny M1. Nie oznacza liczby testów ani granicy wykrywalności.

Czy płytka pozwala przebadać 96 próbek?

Nie. Płytka zawiera 96 studzienek, ale w każdej serii część z nich jest przeznaczona na pięć standardów. Faktyczna liczba próbek zależy od liczby wykonywanych serii.

Czy mleko surowe wymaga odtłuszczania?

Nie. Zgodnie z instrukcją mleko surowe po doprowadzeniu do temperatury pokojowej jest analizowane bezpośrednio, bez odtłuszczania.

Jaka jest granica wykrywalności?

Deklarowana granica wykrywalności wynosi 25 ng/l dla mleka surowego oraz 250 ng/l dla mleka w proszku po uwzględnieniu dziesięciokrotnego rozcieńczenia.

Ile trwa wykonanie oznaczenia?

Właściwe inkubacje trwają łącznie 20 minut: 10 minut z próbką, 5 minut z koniugatem i 5 minut z roztworem wywołującym. Do czasu pracy należy doliczyć pipetowanie, płukanie oraz przygotowanie odczynników i próbek.

Co oznacza dopisek SVHC?

Dopisek informuje o obecności w jednym z odczynników N-metylo-2-pirolidonu, zaliczanego do substancji wzbudzających szczególnie duże obawy. Nie oznacza osobnego wariantu analitycznego produktu.

Czy test wymaga czytnika ELISA?

Tak. Ilościowe oznaczenie wymaga pomiaru absorbancji przy długości fali 450 nm za pomocą manualnego lub automatycznego czytnika mikropłytek.

Potrzebujesz pomocy w dobraniu testu do kontroli aflatoksyny M1 w mleku? Informacje znajdziesz w bazie wiedzy BestLabs:

Jeżeli potrzebujesz pomocy w wyborze zakresu oznaczenia, wariantu testu lub materiałów dodatkowych, skontaktuj się ze specjalistą BestLabs: