Celer® FUMO Fumonisins test ELISA do ilościowego oznaczania fumonizyn 96 oznaczeń

Celer FUMO - test ELISA do ilościowego oznaczania fumonizyn, 96 oznaczeń

Celer FUMO to konkurencyjny test immunoenzymatyczny ELISA przeznaczony do ilościowego oznaczania fumonizyn ogółem w zbożach i paszach. Zastosowane przeciwciała wykrywają fumonizyny B1, B2 i B3, a krzywa kalibracyjna przygotowywana jest z użyciem standardów fumonizyny B1.

Zestaw umożliwia wykonanie 96 oznaczeń, wliczając standardy. Szybka, 20-minutowa procedura ELISA wspiera przesiewową kontrolę jakości surowców zbożowych, produktów przemiału oraz mieszanek paszowych.

Kluczowe cechy i parametry techniczne

Zastosowanie

Celer FUMO jest przeznaczony do przesiewowej analizy fumonizyn w odpowiednio przygotowanych próbkach:

• zbóż, w szczególności kukurydzy i produktów kukurydzianych,
• surowców zbożowych,
• mieszanek i produktów paszowych.

Test może być wykorzystywany przez laboratoria przemysłu spożywczego i paszowego, producentów zbóż, wytwórnie pasz oraz laboratoria badawcze. Umożliwia szybką analizę próbek podczas przyjęcia surowca, kontroli procesu i oceny gotowych partii produktów.

Wynik oznaczenia należy interpretować w odniesieniu do rodzaju próbki, zastosowanej procedury przygotowania oraz aktualnych limitów obowiązujących dla danego produktu i rynku docelowego.

Jakie fumonizyny wykrywa Celer FUMO?

Przeciwciała zastosowane w teście wykazują następującą reaktywność krzyżową:

• fumonizyna B1: 100%,
• fumonizyna B2: 124 ± 11%,
• fumonizyna B3: 100 ± 10%.

Z tego względu test nie jest selektywnym oznaczeniem wyłącznie fumonizyny B1. Wynik odzwierciedla łączną odpowiedź wobec fumonizyn B1, B2 i B3, wyrażoną na podstawie krzywej kalibracyjnej przygotowanej ze standardów fumonizyny B1.

Zasada działania testu

W studzienkach do wstępnego mieszania łączy się koniugat enzymatyczny ze standardem albo rozcieńczonym ekstraktem próbki. Mieszaninę przenosi się następnie do studzienek opłaszczonych przeciwciałami przeciwko fumonizynom.

Fumonizyny znajdujące się w próbce konkurują ze znakowaną enzymatycznie fumonizyną o miejsca wiążące przeciwciał. Po inkubacji niezwiązane składniki są usuwane podczas płukania.

Po dodaniu substratu chromogennego powstaje niebieskie zabarwienie, które po zatrzymaniu reakcji zmienia kolor na żółty. Absorbancję mierzy się przy 450 nm.

Intensywność barwy jest odwrotnie proporcjonalna do stężenia fumonizyn w próbce. Wyższa zawartość fumonizyn powoduje uzyskanie niższej wartości absorbancji.

Zawartość zestawu

• płytka do wstępnego mieszania: 96 nieopłaszczonych studzienek, 12 pasków po 8 studzienek,
• płytka testowa: 96 studzienek opłaszczonych przeciwciałami przeciwko fumonizynom,
• 5 standardów fumonizyny B1 po 1,5 ml: 0; 0,75; 4; 20 i 60 ppm,
• koniugat enzymatyczny: 14 ml,
• bufor płuczący 10×: 50 ml,
• roztwór wywołujący barwę: 14 ml,
• roztwór zatrzymujący reakcję: 8 ml.

Odłamywane paski umożliwiają wykorzystanie liczby studzienek odpowiadającej wielkości aktualnie wykonywanej serii.

Materiały wymagane, ale niedostarczane

• woda destylowana lub dejonizowana,
• metanol do przygotowania 70% roztworu ekstrakcyjnego,
• chlorek sodu,
• waga laboratoryjna,
• młynek albo homogenizator,
• wytrząsarka, opcjonalnie,
• bibuła filtracyjna, np. Whatman nr 1,
• mikropipety jedno- i wielokanałowe z odpowiednimi końcówkami,
• czytnik mikropłytek ELISA z filtrem 450 nm,
• materiały do ręcznego albo automatycznego płukania studzienek.

Przygotowanie próbek zbóż

1. Dokładnie wymieszać próbkę i drobno ją rozdrobnić.
2. Odważyć 50 g próbki i dodać 10 g NaCl oraz 250 ml 70% metanolu.
3. Alternatywnie odważyć 5 g próbki, dodać 1 g NaCl i 25 ml 70% metanolu.
4. Intensywnie wytrząsać przez 3 minuty.
5. Przefiltrować przez odpowiednią bibułę i zebrać filtrat.
6. Rozcieńczyć filtrat dwudziestokrotnie wodą destylowaną: 50 µl ekstraktu dodać do 950 µl wody.

Chlorek sodu można również uwzględnić bezpośrednio w roztworze ekstrakcyjnym. Producent opisuje zastosowanie 70% metanolu zawierającego 4% NaCl.

Przygotowanie próbek pasz

1. Dokładnie wymieszać próbkę i drobno ją rozdrobnić.
2. Odważyć 50 g próbki, dodać 10 g NaCl i 250 ml 70% metanolu.
3. Alternatywnie zastosować 5 g próbki, 1 g NaCl i 25 ml 70% metanolu.
4. Intensywnie wytrząsać przez 15 minut.
5. Przefiltrować próbkę i zebrać filtrat.
6. Rozcieńczyć filtrat dwudziestokrotnie wodą destylowaną: 50 µl ekstraktu i 950 µl wody.

Producent rekomenduje pobranie 50 g materiału, aby zwiększyć reprezentatywność oznaczenia. Ekstrakty należy wykorzystać w dniu ich przygotowania i nie przechowywać do kolejnego dnia.

Przebieg oznaczenia ELISA

1. Zaplanować rozmieszczenie pięciu standardów i próbek na płytce oraz przygotować odpowiadającą liczbę studzienek do wstępnego mieszania.
2. Dodać po 100 µl koniugatu enzymatycznego do studzienek wstępnego mieszania.
3. Dodać po 50 µl standardu albo rozcieńczonego ekstraktu próbki.
4. Wymieszać przez trzykrotne pipetowanie i natychmiast przenieść po 100 µl mieszaniny do odpowiednich studzienek płytki testowej.
5. Inkubować przez 10 minut w temperaturze pokojowej, bez użycia wytrząsarki.
6. Usunąć zawartość i trzykrotnie przemyć studzienki rozcieńczonym buforem płuczącym.
7. Dodać po 100 µl roztworu wywołującego barwę.
8. Inkubować przez 10 minut w temperaturze pokojowej, chroniąc płytkę przed bezpośrednim światłem.
9. Dodać po 50 µl roztworu zatrzymującego reakcję.
10. Zmierzyć absorbancję przy 450 nm w ciągu 60 minut.

Producent zaleca wykonywanie maksymalnie 48 oznaczeń w jednej serii, wliczając standardy. Jeśli nie jest używana pipeta wielokanałowa, zalecana maksymalna wielkość serii wynosi 16 oznaczeń.

Ograniczenia metody

Ze względu na reaktywność przeciwciał wobec fumonizyn B1, B2 i B3 wynik należy traktować jako ilościową ocenę fumonizyn ogółem, a nie selektywne oznaczenie pojedynczej fumonizyny.

Test jest metodą przesiewową. Próbki ocenione jako dodatnie powinny zostać ponownie przebadane odpowiednią metodą potwierdzającą. Wynik ujemny odnosi się wyłącznie do przebadanej próbki, zastosowanej procedury i deklarowanej granicy wykrywalności.

Duże znaczenie ma reprezentatywność pobranego materiału. Mikotoksyny mogą być rozmieszczone w partii nierównomiernie, dlatego sposób pobrania, rozdrobnienia i homogenizacji próbki powinien zostać określony w zatwierdzonej procedurze laboratoryjnej.

Bezpieczeństwo i przechowywanie

• Przechowywać zestaw w temperaturze 2–8°C.
• Nie zamrażać odczynników.
• Przed użyciem pozostawić wszystkie komponenty przez co najmniej godzinę w temperaturze pokojowej.
• Nie otwierać opakowania płytki przed osiągnięciem przez nią temperatury pokojowej.
• Niewykorzystane paski ponownie zamknąć w torebce ze środkiem osuszającym.
• Nie mieszać komponentów pochodzących z różnych partii zestawu.
• Roztwór zatrzymujący zawiera kwas siarkowy i wymaga ostrożnego postępowania.
• Standardy zawierają metanol, a roztwór wywołujący może zawierać N-metylo-2-pirolidon.
• Podczas przygotowania próbek i pracy z odczynnikami stosować rękawice, fartuch, ochronę oczu oraz odpowiednią wentylację.
• Przed użyciem zapoznać się z aktualną kartą charakterystyki właściwą dla dostarczonej partii.

FAQ - najczęściej zadawane pytania

Jakie fumonizyny wykrywa test Celer FUMO?

Test reaguje z fumonizynami B1, B2 i B3. Krzywa kalibracyjna jest przygotowywana ze standardów fumonizyny B1, a wynik przedstawia ilościową odpowiedź dla fumonizyn ogółem.  

Jaka jest granica wykrywalności testu?

Deklarowana granica wykrywalności wynosi 0,75 ppm, czyli 750 µg/kg. Granica oznaczalności dla kukurydzy i pasz wynosi 1 ppm.

Ile trwa wykonanie testu?

Właściwa procedura ELISA obejmuje dwie inkubacje po 10 minut, czyli łącznie 20 minut. Do pełnego czasu badania należy doliczyć rozdrabnianie, ekstrakcję, filtrację, rozcieńczanie i płukanie płytki.

Czy test wymaga czytnika ELISA?

Tak. Ilościowe oznaczenie wymaga pomiaru absorbancji przy długości fali 450 nm za pomocą manualnego lub automatycznego czytnika mikropłytek.

Czy wynik dodatni wymaga potwierdzenia?

Tak. Producent wskazuje, że próbki ocenione jako dodatnie należy ponownie przebadać właściwą metodą potwierdzającą.

Czy próbki zbóż i pasz przygotowuje się identycznie?

Stosuje się ten sam układ ilości próbki i 70% metanolu, ale różny czas ekstrakcji. Dla zbóż producent wskazuje 3 minuty wytrząsania, a dla pasz 15 minut.

Potrzebujesz pomocy w dobraniu testu do oznaczania fumonizyn lub przygotowaniu właściwej procedury ekstrakcji? Informacje znajdziesz w bazie wiedzy BestLabs:

Jeżeli potrzebujesz pomocy w wyborze testu, zakresu oznaczenia lub wyposażenia do ELISA, skontaktuj się ze specjalistą BestLabs: