Celer® OCHRA Ochratoxin test ELISA do oznaczania ochratoksyny A 96 oznaczeń

Celer OCHRA - test ELISA do oznaczania ochratoksyny A, 96 oznaczeń

Celer OCHRA to konkurencyjny test immunoenzymatyczny przeznaczony do ilościowego oznaczania ochratoksyny A w zbożach, otrębach pszennych, gryce, mące gryczanej oraz próbkach kakao. Zestaw umożliwia wykonanie 96 oznaczeń łącznie ze standardami.

Procedura testowa trwa około 20 minut, nie uwzględniając przygotowania i ekstrakcji próbki. Wynik odczytuje się fotometrycznie przy długości fali 450 nm. Test może być wykonywany manualnie lub przy użyciu kompatybilnego automatycznego systemu ELISA.

Kluczowe cechy i parametry techniczne

Matryce i parametry oznaczenia

Instrukcja producenta przewiduje analizę zbóż, otrąb pszennych, gryki, mąki gryczanej, ziaren kakao oraz kakao naturalnego i alkalizowanego. Parametry zależą od rodzaju badanej matrycy.

Producent podaje również orientacyjne granice wykrywalności wynoszące 2 ppb dla zbóż, gryki, mąki gryczanej i próbek kakao oraz 4 ppb dla otrąb pszennych.

Zasada działania testu

Dołki płytki pomiarowej są opłaszczone przeciwciałami skierowanymi przeciwko ochratoksynie. W płytce do wstępnego mieszania próbka lub standard są łączone ze znakowanym enzymatycznie koniugatem ochratoksyny.

Ochratoksyna A znajdująca się w próbce konkuruje ze znakowanym koniugatem o miejsca wiążące przeciwciał. Po inkubacji niezwiązane składniki są usuwane podczas płukania. Dodanie substratu prowadzi do powstania niebieskiego zabarwienia, które po zastosowaniu roztworu zatrzymującego zmienia kolor na żółty.

Intensywność barwy jest odwrotnie proporcjonalna do stężenia ochratoksyny A: im więcej analitu znajduje się w próbce, tym niższa jest zmierzona absorbancja.

Zawartość zestawu

• płytka do wstępnego mieszania – 96 nieopłaszczonych dołków,
• płytka pomiarowa – 96 dołków opłaszczonych przeciwciałami przeciwko ochratoksynie,
• 5 standardów ochratoksyny A po 1,5 ml: 0, 2, 5, 25 i 50 ppb,
• 200 µl skoncentrowanego koniugatu enzymatycznego,
• 14 ml rozcieńczalnika koniugatu,
• 50 ml 10-krotnie stężonego buforu płuczącego,
• 14 ml roztworu wywołującego,
• 8 ml roztworu zatrzymującego.

Materiały wymagane, lecz niedostarczane

• metanol lub Mycotoxin Extraction Solution A,
• chlorek sodu i woda destylowana,
• papier filtracyjny, np. Whatman nr 1,
• waga laboratoryjna oraz młynek lub homogenizator,
• pipety automatyczne jedno- i wielokanałowe z końcówkami,
• czytnik mikropłytek z filtrem 450 nm,
• opcjonalnie wytrząsarka do ekstrakcji.

Do przygotowania próbek kakao potrzebne są dodatkowo: 1 M HCl, 2-procentowy roztwór wodorowęglanu sodu, PBS 1X oraz kolumna immunopowinowactwa SENSIColumn IAC Ochratoxin SMART.

Przygotowanie próbek

Zboża, gryka i mąka gryczana

Rozdrobnioną i ujednorodnioną próbkę ekstrahuje się 70-procentowym metanolem z dodatkiem NaCl. Producent przewiduje między innymi wariant 50 g próbki, 10 g NaCl i 250 ml roztworu ekstrakcyjnego albo wariant zmniejszony: 5 g próbki, 1 g NaCl i 25 ml roztworu. Próbkę należy intensywnie mieszać przez 3 minuty, a następnie przefiltrować.

Otręby pszenne

Do 5 g rozdrobnionej próbki dodaje się 50 ml 70-procentowego metanolu. Po 3 minutach intensywnego mieszania ekstrakt należy przefiltrować. Dla tej procedury współczynnik rozcieńczenia wynosi 2.

Ziarna kakao i naturalne kakao w proszku

Próbkę 10 g ekstrahuje się kolejno metanolem i 2-procentowym roztworem wodorowęglanu sodu. Po filtracji ekstrakt rozcieńcza się PBS, reguluje jego pH do 7,4 i oczyszcza na kolumnie immunopowinowactwa. Eluat metanolowy rozcieńcza się przed wykonaniem testu.

Kakao alkalizowane

Próbkę 10 g ekstrahuje się 50-procentowym metanolem zawierającym 4% NaCl, a następnie poddaje oczyszczaniu na kolumnie immunopowinowactwa zgodnie z instrukcją producenta.

Ważne: przygotowane ekstrakty należy wykorzystać w dniu ekstrakcji. Producent zaleca pobranie 50 g materiału, jeśli jest to możliwe, aby zwiększyć reprezentatywność próbki.

Procedura oznaczenia ELISA

1. Przygotować układ płytki dla standardów i próbek.
2. Do każdego dołka płytki do wstępnego mieszania dodać 100 µl roboczego koniugatu enzymatycznego.
3. Dodać 50 µl odpowiedniego standardu lub ekstraktu próbki.
4. Wymieszać przez trzykrotne pipetowanie i natychmiast przenieść 100 µl do odpowiedniego dołka płytki opłaszczonej przeciwciałami.
5. Inkubować przez 10 minut w temperaturze pokojowej, bez wytrząsania.
6. Usunąć zawartość i trzykrotnie wypłukać dołki buforem roboczym.
7. Dodać po 100 µl roztworu wywołującego.
8. Inkubować przez 10 minut w temperaturze pokojowej, chroniąc płytkę przed światłem.
9. Dodać po 50 µl roztworu zatrzymującego.
10. Zmierzyć absorbancję przy 450 nm w ciągu 15 minut.

Producent zaleca wykonywanie maksymalnie 48 oznaczeń w jednej serii, wliczając standardy. Bez pipety wielokanałowej zalecana liczba wynosi maksymalnie 16 oznaczeń w serii.    

Przechowywanie i bezpieczeństwo

• Przechowywać zestaw w temperaturze 2-8°C.
• Nie zamrażać odczynników.
• Przed użyciem doprowadzić wszystkie komponenty do temperatury pokojowej przez co najmniej godzinę.
• Nie otwierać opakowania płytki przed osiągnięciem przez nią temperatury pokojowej.
• Niewykorzystane paski przechowywać szczelnie zamknięte z pochłaniaczem wilgoci.
• Nie mieszać składników pochodzących z różnych numerów partii.
• Roztwór zatrzymujący zawiera 1 M kwas siarkowy i wymaga stosowania odpowiednich środków ochrony.

Próbki ocenione jako dodatnie należy ponownie zbadać odpowiednią metodą potwierdzającą. Wyniki powinny być interpretowane zgodnie z aktualną instrukcją producenta i zatwierdzoną procedurą SOP.

FAQ - najczęściej zadawane pytania

Co oznacza „96 det.” w nazwie produktu?

Oznacza 96 oznaczeń, wliczając dołki wykorzystane na pięć standardów. Nie oznacza to możliwości zbadania 96 niezależnych próbek.

Jakie próbki można badać testem Celer OCHRA?

Test jest przeznaczony do badania zbóż, otrąb pszennych, gryki, mąki gryczanej, ziaren kakao oraz naturalnego i alkalizowanego kakao w proszku.

Jak długo trwa wykonanie testu?

Etap ELISA trwa około 20 minut: 10 minut pierwszej inkubacji i 10 minut wywoływania. Czas ten nie obejmuje przygotowania i ekstrakcji próbki.

Czy do wykonania testu potrzebny jest czytnik ELISA?

Tak. Ilościowy wynik wymaga pomiaru absorbancji przy długości fali 450 nm za pomocą manualnego lub automatycznego czytnika mikropłytek.

Czy wynik dodatni wymaga potwierdzenia?

Tak. Producent wskazuje, że próbki ocenione jako dodatnie należy ponownie zbadać właściwą metodą potwierdzającą.

Potrzebujesz pomocy w dobraniu idealnego produktu dla Twojego laboratorium? Informacje na ten temat znajdziesz tu:

Nie znalazłeś takiego produktu na BestLabs? Skontaktuj się z nami - specjaliści BestLabs na pewno znajdą odpowiedni dla Państwa produkt: