Celer® ZEA Zearalenone, test ELISA, 96 studzienek - SVHC

Celer® ZEA - test ELISA do oznaczania zearalenonu, 96 oznaczeń

Celer® ZEA to konkurencyjny test immunoenzymatyczny przeznaczony do ilościowego oznaczania zearalenonu w zbożach, paszach, DDGS oraz wybranych produktach kukurydzianych. Zestaw wspiera kontrolę surowców i produktów narażonych na zanieczyszczenie tą mykotoksyną.

Procedura ELISA trwa około 20 minut, nie uwzględniając przygotowania próbki. Wynik odczytuje się fotometrycznie przy długości fali 450 nm. Oznaczenie można wykonywać manualnie lub przy użyciu kompatybilnego automatycznego systemu ELISA. Metoda została zwalidowana przez producenta na analizatorze The Bolt™.

Kluczowe cechy i parametry techniczne

Zastosowanie i badane matryce

Celer ZEA jest przeznaczony do analizy:

• zbóż, w tym kukurydzy, pszenicy zwyczajnej, ryżu i sorgo,
• pasz i pasz dla trzody chlewnej,
• pasz dla bydła,
• DDGS – suszonego wywaru gorzelnianego z substancjami rozpuszczalnymi,
• kiszonki kukurydzianej,
• śruty lub zacieru kukurydzianego zgodnie z odpowiednią notą aplikacyjną producenta.

Produkt znajduje zastosowanie w laboratoriach badawczych, zakładach zbożowych, wytwórniach pasz oraz działach kontroli jakości. Pozwala prowadzić przesiewową analizę próbek przed przyjęciem surowca, magazynowaniem lub wykorzystaniem go w procesie produkcyjnym.

Parametry dla poszczególnych matryc

Cut-off i granica oznaczalności zależą od składu matrycy. Deklarowana ogólna granica wykrywalności testu wynosi 10 ppb.

Specyficzność testu

Krzywa kalibracyjna jest przygotowana z użyciem standardów zearalenonu. Obecność jego pochodnych może wpływać na wynik odpowiednio do deklarowanej reaktywności krzyżowej.

Zasada działania testu

Dołki płytki pomiarowej są opłaszczone przeciwciałami przeciwko zearalenonowi. W płytce do wstępnego mieszania próbka lub standard są łączone ze znakowanym enzymatycznie koniugatem zearalenonu.

Podczas pierwszej inkubacji zearalenon obecny w próbce konkuruje ze znakowanym koniugatem o miejsca wiążące przeciwciał. Po usunięciu niezwiązanych składników do dołków dodawany jest substrat chromogenny. Powstające niebieskie zabarwienie po zastosowaniu roztworu zatrzymującego zmienia kolor na żółty.

Intensywność barwy jest odwrotnie proporcjonalna do stężenia zearalenonu: im więcej analitu znajduje się w próbce, tym niższa jest zmierzona absorbancja.

Zawartość zestawu

• płytka do wstępnego mieszania – 96 nieopłaszczonych dołków,
• płytka pomiarowa – 96 dołków opłaszczonych przeciwciałami przeciwko zearalenonowi,
• 5 standardów zearalenonu po 1,5 ml: 0, 10, 50, 400 i 1000 ppb,
• 14 ml gotowego do użycia koniugatu enzymatycznego,
• 50 ml 10-krotnie stężonego buforu płuczącego,
• 14 ml roztworu wywołującego,
• 8 ml roztworu zatrzymującego.

Materiały wymagane, lecz niedostarczane

• woda destylowana lub dejonizowana,
• metanol albo Mycotoxin Extraction Solution A, nr kat. HU0040103,
• chlorek sodu,
• węgiel aktywny DARCO®, wielkość cząstek 20-40 mesh – dla wskazanych matryc,
• waga laboratoryjna,
• młynek lub homogenizator,
• opcjonalnie wytrząsarka do ekstrakcji,
• papier filtracyjny, np. Whatman nr 1,
• pipety automatyczne jedno- i wielokanałowe z końcówkami,
• czytnik mikropłytek z filtrem 450 nm.

Przygotowanie próbek

Zboża inne niż sorgo oraz pasze

1. Próbkę dokładnie wymieszać, ujednorodnić i drobno zmielić.
2. Odważyć 50 g próbki, dodać 10 g NaCl i 250 ml 70-procentowego metanolu.
3. Alternatywnie zastosować wariant zmniejszony: 5 g próbki, 1 g NaCl i 25 ml 70-procentowego metanolu.
4. Intensywnie mieszać przez 3 minuty.
5. Przefiltrować i zebrać filtrat przeznaczony do oznaczenia.

Sorgo

Do 50 g rozdrobnionej próbki dodaje się 250 ml 70-procentowego metanolu. Można zastosować wariant 5 g próbki i 25 ml roztworu. Po 3 minutach intensywnego mieszania ekstrakt należy przefiltrować.

DDGS

Próbkę 50 g ekstrahuje się 250 ml 70-procentowego metanolu albo stosuje wariant 5 g i 25 ml. Czas ekstrakcji wynosi 15 minut. W przypadku bardzo silnie zanieczyszczonych próbek producent zaleca rozważenie wydłużenia ekstrakcji do 60 minut.

Kiszonka kukurydziana

Mokrą próbkę można wysuszyć w temperaturze nieprzekraczającej 60°C. Do 5 g rozdrobnionego materiału dodaje się 25 ml 70-procentowego metanolu zawierającego 4% NaCl. Po 3 minutach mieszania dodaje się 1,4 g węgla aktywnego DARCO®, miesza przez kolejną minutę, filtruje i reguluje pH ekstraktu do wartości 7.

Pasza dla bydła

Do 5 g rozdrobnionej paszy dodaje się 1,4 g węgla aktywnego oraz 25 ml 70-procentowego metanolu zawierającego 4% NaCl. Po 3 minutach mieszania próbkę należy przefiltrować i wyregulować pH filtratu do wartości 7.

Śruta lub zacier kukurydziany

Procedura została sprawdzona przez producenta na ograniczonej liczbie wariantów próbek. Przed badaniem tej matrycy należy zastosować właściwą notę aplikacyjną lub skontaktować się z pomocą techniczną producenta.

Ważne: ekstrakty należy wykorzystać w dniu przygotowania. Producent zaleca pobranie 50 g materiału, jeśli jest to możliwe, aby zwiększyć reprezentatywność analizy.

Jeżeli wynik przekracza 1000 ppb, ekstrakt należy rozcieńczyć pięciokrotnie, w proporcji 1 + 4, 70-procentowym metanolem. Pozwala to rozszerzyć zakres oznaczenia do 50-5000 ppb. Wynik odczytany z krzywej należy wówczas pomnożyć przez 5.

Procedura oznaczenia ELISA

1. Przygotować układ płytki, uwzględniając pięć standardów i badane próbki.
2. Do każdego wykorzystywanego dołka płytki do wstępnego mieszania dodać 100 µl koniugatu enzymatycznego.
3. Dodać po 50 µl odpowiedniego standardu lub przygotowanego ekstraktu próbki.
4. Wymieszać przez trzykrotne pipetowanie.
5. Natychmiast przenieść 100 µl mieszaniny do odpowiedniego dołka płytki opłaszczonej przeciwciałami.
6. Inkubować przez 10 minut w temperaturze pokojowej, bez wytrząsania.
7. Usunąć zawartość i trzykrotnie wypłukać dołki roboczym buforem płuczącym.
8. Dodać po 100 µl roztworu wywołującego.
9. Inkubować przez 10 minut w temperaturze pokojowej, chroniąc płytkę przed światłem.
10. Dodać po 50 µl roztworu zatrzymującego i wymieszać.
11. Zmierzyć absorbancję przy 450 nm w ciągu 60 minut.

Producent zaleca wykonywanie maksymalnie 48 oznaczeń w jednej serii, wliczając standardy. Bez pipety wielokanałowej zalecana liczba wynosi maksymalnie 16 oznaczeń w serii.    

Przechowywanie i bezpieczeństwo

• Przechowywać zestaw w temperaturze 2-8°C.
• Nie zamrażać odczynników.
• Przed użyciem doprowadzić wszystkie komponenty do temperatury pokojowej przez co najmniej godzinę.
• Nie otwierać opakowania płytki przed osiągnięciem przez nią temperatury pokojowej.
• Niewykorzystane paski przechowywać szczelnie zamknięte z pochłaniaczem wilgoci.
• Nie mieszać elementów pochodzących z różnych numerów partii.
• Chronić roztwór wywołujący przed bezpośrednim światłem.
• Roztwór zatrzymujący zawiera 1 M kwas siarkowy i wymaga stosowania odpowiednich środków ochrony osobistej.

Próbki ocenione jako dodatnie należy ponownie zbadać właściwą metodą potwierdzającą. Przygotowanie próbek, kryteria akceptacji i sposób raportowania wyników powinny zostać opisane w zatwierdzonej procedurze SOP.

FAQ - najczęściej zadawane pytania

Co oznacza „96 det.” w nazwie produktu?

Oznacza 96 oznaczeń, wliczając standardy. Nie jest to równoznaczne z możliwością przebadania 96 niezależnych próbek.

Co wykrywa test Celer ZEA?

Test służy do ilościowego oznaczania zearalenonu. Może również reagować z niektórymi pochodnymi zearalenonu zgodnie z deklarowaną reaktywnością krzyżową.

Jakie próbki można badać?

Test jest przeznaczony do analizy zbóż, pasz, DDGS, kiszonki kukurydzianej oraz śruty lub zacieru kukurydzianego badanego według właściwej noty aplikacyjnej.

Jak długo trwa wykonanie oznaczenia?

Etap ELISA trwa około 20 minut: 10 minut pierwszej inkubacji i 10 minut wywoływania. Czas nie obejmuje rozdrobnienia, ekstrakcji i filtracji próbki.

Jaka jest granica wykrywalności testu?

Deklarowana ogólna granica wykrywalności wynosi 10 ppb. Parametry cut-off oraz LOQ zależą od rodzaju badanej matrycy.

Czy do wykonania testu potrzebny jest czytnik ELISA?

Tak. Ilościowy wynik wymaga pomiaru absorbancji przy długości fali 450 nm za pomocą manualnego lub automatycznego czytnika mikropłytek.

Potrzebujesz pomocy w dobraniu idealnego produktu dla Twojego laboratorium? Informacje na ten temat znajdziesz tu:

Nie znalazłeś takiego produktu na BestLabs? Skontaktuj się z nami - specjaliści BestLabs na pewno znajdą odpowiedni dla Państwa produkt: