ComASP® Vancomycin 0,008-128 - płytka do oznaczenia MIC metodą mikrorozcieńczeń

Liofilchem® ComASP® Vancomycin 0,008–128 – panel do oznaczania MIC, 8 testów

Liofilchem® ComASP® Vancomycin 0,008–128 to wyrób do diagnostyki in vitro przeznaczony do ilościowego oznaczania minimalnego stężenia hamującego – MIC wankomycyny wobec wyizolowanych bakterii Gram-dodatnich z rodzajów Staphylococcus i Enterococcus.

System stanowi kompaktową wersję referencyjnej metody mikrorozcieńczeń w bulionie – BMD. Każdy panel zawiera dwa niezależne tory testowe z wankomycyną wysuszoną w 15 kolejnych dwukrotnych rozcieńczeniach oraz studzienkę kontroli wzrostu.

Produkt wspiera wykonywanie profesjonalnych badań lekowrażliwości zgodnie z zasadami metody opisanej w ISO 20776-1. Uzyskany wynik MIC należy interpretować według aktualnych kryteriów przyjętych przez laboratorium, na przykład EUCAST albo CLSI.

Kluczowe cechy i parametry techniczne

Zakres stężeń wankomycyny

Każdy tor testowy zawiera kontrolę wzrostu oraz następujące stężenia wankomycyny:

0,008; 0,016; 0,032; 0,064; 0,125; 0,25; 0,5; 1; 2; 4; 8; 16; 32; 64 i 128 µg/ml.

Po zaszczepieniu standaryzowaną zawiesiną studzienki są inkubowane przez 16–20 godzin. Wartość MIC odpowiada najniższemu stężeniu wankomycyny, przy którym nie obserwuje się widocznego wzrostu badanego izolatu.

Zawartość zestawu

• 4 panele ComASP® Vancomycin 0,008–128, pakowane pojedynczo z pochłaniaczem wilgoci,
• 2 niezależne tory testowe na każdym panelu,
• 8 probówek Mueller Hinton II Broth po 3,6 ml,
• folia do zabezpieczania zaszczepionych studzienek,
• instrukcja użycia i formularz wyników.

Zestaw nie zawiera między innymi roztworu fizjologicznego, wzorca 0,5 McFarlanda, pipet, końcówek, wymazówek, ez, probówek, podłoży do izolacji, inkubatora ani szczepów kontroli jakości.

Przeznaczenie produktu

ComASP® Vancomycin jest przeznaczony do badania czystych, wcześniej wyizolowanych hodowli bakterii. Panelu nie należy zaszczepiać bezpośrednio materiałem klinicznym.

Mikroorganizm powinien zostać wyizolowany na odpowiednim podłożu nieselektywnym, takim jak agar z krwią lub TSA. W przypadku hodowli mieszanej wybraną kolonię należy oczyścić przez ponowny posiew. Producent zaleca stosowanie świeżej hodowli, zwykle nie starszej niż 24 godziny.

Panel może być wykorzystywany przez profesjonalne laboratoria mikrobiologiczne wykonujące analizę lekowrażliwości izolatów klinicznych. Wynik powinien być oceniany przez przeszkolony personel i rozpatrywany wraz z identyfikacją mikroorganizmu oraz informacjami klinicznymi.

Procedura wykonania oznaczenia

1. Doprowadzić panel do temperatury pokojowej przez około 10 minut.
2. Przygotować zawiesinę czystej hodowli badanego mikroorganizmu.
3. Ustalić gęstość zawiesiny na poziomie 0,5 McFarlanda.
4. Optymalnie w ciągu 15 minut rozcieńczyć zawiesinę w stosunku 1:20 w jałowym roztworze fizjologicznym. Jest to roztwór A.
5. Dodać 0,4 ml roztworu A do dołączonej probówki z bulionem Mueller Hinton II. Jest to roztwór B.
6. Wprowadzić po 100 µl roztworu B do każdej studzienki wybranego toru A albo B.
7. Zabezpieczyć zaszczepioną część panelu zgodnie z instrukcją producenta.
8. Inkubować przez 16–20 godzin w temperaturze 36 ± 2°C, w atmosferze tlenowej.
9. Najpierw sprawdzić studzienkę kontroli wzrostu, a następnie odczytać wartość MIC.

Dokładne przygotowanie inokulum, objętości, czas pracy oraz warunki inkubacji powinny zostać opisane w zatwierdzonej procedurze SOP.

Odczyt wyniku

Wzrost mikroorganizmu może być widoczny jako zmętnienie albo osad na dnie studzienki. Studzienkę kontroli wzrostu należy ocenić jako pierwszą. Brak wzrostu w kontroli oznacza, że wynik badania jest nieważny.

Wartość MIC stanowi najniższe stężenie wankomycyny całkowicie hamujące widoczny wzrost. Odczyt można wykonać wizualnie, najlepiej przy jasnym świetle pośrednim i na ciemnym tle, albo za pomocą odpowiednio zwalidowanego systemu automatycznego.

Uzyskana wartość powinna zostać zapisana w dokumentacji badania lub systemie LIMS wraz z identyfikacją izolatu, numerem partii produktu, datą, wynikiem kontroli jakości i zastosowaną wersją kryteriów interpretacyjnych.

Interpretacja według EUCAST

Zgodnie z tabelami EUCAST 16.1 wartości graniczne MIC dla wankomycyny wynoszą:

• Staphylococcus aureus: S ≤ 2 mg/l; R > 2 mg/l,
• gronkowce koagulazoujemne: S ≤ 4 mg/l; R > 4 mg/l,
• Enterococcus faecalis i Enterococcus faecium: S ≤ 4 mg/l; R > 4 mg/l,
• pozostałe enterokoki objęte breakpointami: S ≤ 4 mg/l; R > 4 mg/l.

Dla Enterococcus casseliflavus i Enterococcus gallinarum EUCAST nie podaje klinicznych breakpointów wankomycyny. Gatunki te wykazują naturalny mechanizm oporności VanC, dlatego wyników nie należy interpretować przy użyciu kryteriów przeznaczonych dla E. faecalis i E. faecium.

Istotna uwaga: według EUCAST wartość MIC wankomycyny równa 2 mg/l dla S. aureus leży na granicy rozkładu populacji typu dzikiego i może wiązać się z osłabioną odpowiedzią kliniczną.

Kryteria EUCAST i CLSI mogą różnić się zakresem gatunków, wartościami granicznymi oraz zasadami raportowania. Laboratorium powinno stosować jeden zatwierdzony system interpretacyjny i jego aktualną wersję.

Kontrola jakości

Producent wskazuje następujące szczepy referencyjne i oczekiwane zakresy MIC:

• Staphylococcus aureus ATCC® 29213 / NCTC 12973: 0,5–2 µg/ml,
• Enterococcus faecalis ATCC® 29212 / NCTC 12697: 1–4 µg/ml.

Jeżeli wynik szczepu kontrolnego znajduje się poza oczekiwanym zakresem, należy sprawdzić między innymi czystość i świeżość hodowli, gęstość inokulum, sposób rozcieńczenia, warunki przechowywania panelu oraz parametry inkubacji. Wyników izolatów badanych w serii z nieprawidłową kontrolą jakości nie należy zatwierdzać bez wyjaśnienia przyczyny.

Dane dotyczące działania produktu

Producent porównał wyniki ComASP® Vancomycin z referencyjną metodą mikrorozcieńczeń w bulionie dla 300 izolatów klinicznych:

• Staphylococcus aureus – 150 izolatów: EA 92,0%; CA 98,7%,
• gronkowce koagulazoujemne – 30 izolatów: EA 100%; CA 100%,
• Enterococcus spp. – 120 izolatów: EA 92,5%; CA 97,5%,
• łączna zgodność zasadnicza – EA: 93,0%,
• łączna zgodność kategorialna – CA: 98,3%,
• odtwarzalność: 99,3% wyników w zakresie jednego dwukrotnego rozcieńczenia,
• powtarzalność: 100% wyników w zakresie jednego dwukrotnego rozcieńczenia.

EA oznacza zgodność wartości MIC z metodą referencyjną w granicach ±1 dwukrotnego rozcieńczenia. CA oznacza zgodność kategorii interpretacyjnej z wynikiem metody referencyjnej.

Wysokich wartości powtarzalności i odtwarzalności nie należy utożsamiać z ogólną zgodnością zasadniczą. Każdy z tych parametrów opisuje inny element działania produktu.

Ograniczenia badania

• Panel nie jest przeznaczony do bezpośredniego badania materiału klinicznego.
• Badanie należy wykonywać z użyciem czystej, prawidłowo zidentyfikowanej hodowli.
• Nieprawidłowa gęstość inokulum może powodować zaniżenie albo zawyżenie MIC.
• Wynik poza zakresem panelu należy raportować zgodnie z procedurą laboratorium, na przykład jako ≤0,008 albo >128 µg/ml.
• Wyniki wskazujące na rzadki lub nietypowy fenotyp oporności mogą wymagać potwierdzenia i przekazania izolatu do laboratorium referencyjnego.
• Interpretacja kliniczna wymaga zastosowania aktualnych breakpointów właściwych dla oznaczonego gatunku.
• Wynik MIC nie powinien być jedyną podstawą wyboru terapii, dawki ani sposobu monitorowania leczenia.

Przechowywanie i trwałość

Zestaw należy przechowywać w temperaturze 2–8°C, w oryginalnym opakowaniu. Nie należy używać paneli po upływie terminu ważności, w przypadku uszkodzenia opakowania ani po stwierdzeniu oznak pogorszenia jakości.

Jeżeli wykorzystano tylko jeden tor panelu, zaszczepione studzienki należy zabezpieczyć dołączoną folią, a panel umieścić ponownie w oryginalnej kopercie z pochłaniaczem wilgoci. Po otwarciu koperty panel należy przechowywać w temperaturze 2–8°C i wykorzystać w ciągu 7 dni.

Zużyte panele, hodowle oraz materiały mające kontakt z mikroorganizmami należy dekontaminować i usuwać zgodnie z procedurami dotyczącymi materiału potencjalnie zakaźnego.

FAQ – najczęściej zadawane pytania

Ile oznaczeń zawiera ComASP Vancomycin?

Zestaw zawiera 4 panele z dwoma niezależnymi torami na każdym panelu. Łącznie umożliwia wykonanie 8 oznaczeń MIC.

Czy panel można zaszczepić bezpośrednio próbką kliniczną?

Nie. Produkt jest przeznaczony do badania czystych izolatów. Mikroorganizm należy wcześniej wyizolować na odpowiednim podłożu, zidentyfikować i przygotować zawiesinę 0,5 McFarlanda.

Jak długo trwa oznaczenie MIC wankomycyny?

Po przygotowaniu i naniesieniu inokulum panel inkubuje się przez 16–20 godzin w temperaturze 36 ± 2°C. Całkowity czas badania obejmuje również przygotowanie czystej hodowli i zawiesiny.

Czy wynik MIC równy 2 mg/l dla Staphylococcus aureus oznacza wrażliwość?

Według EUCAST 16.1 wartość 2 mg/l mieści się w kategorii wrażliwości, ale leży na granicy rozkładu populacji typu dzikiego i może wiązać się z osłabioną odpowiedzią kliniczną. Wynik wymaga oceny zgodnej z procedurą laboratorium i kontekstem klinicznym.

Potrzebujesz pomocy w dobraniu idealnego produktu dla Twojego laboratorium? Informacje na ten temat znajdziesz tu:

Nie znalazłeś takiego produktu na BestLabs? Skontaktuj się z nami - specjaliści BestLabs na pewno znajdą odpowiedni dla Państwa produkt: