SureTect™ Salmonella Species PCR Assay test real-time PCR do wykrywania Salmonella spp. w żywności i paszach 96 reakcji

Thermo Scientific™ SureTect™ Salmonella Species PCR Assay - test real-time PCR, 96 oznaczeń

Thermo Scientific™ SureTect™ Salmonella Species PCR Assay to jakościowy test PCR w czasie rzeczywistym przeznaczony do wykrywania DNA Salmonella spp. we wzbogaconych próbkach żywności, karmy dla zwierząt, pasz oraz materiału pobranego ze środowiska produkcyjnego i produkcji pierwotnej.

Zoptymalizowane startery i sondy umożliwiają swoiste wykrywanie sekwencji charakterystycznych dla rodzaju Salmonella. Każda reakcja zawiera wewnętrzną kontrolę dodatnią IPC, która wspiera ocenę prawidłowego przebiegu amplifikacji. Wyniki są automatycznie interpretowane przez kompatybilne oprogramowanie RapidFinder™.

Kluczowe cechy i parametry techniczne

Zastosowanie testu

SureTect Salmonella Species PCR Assay wspiera kontrolę bezpieczeństwa mikrobiologicznego surowców, półproduktów, produktów gotowych oraz środowiska zakładu. Może być stosowany między innymi w laboratoriach zakładów mięsnych, mleczarskich, rybnych, cukierniczych, przetwórstwa owocowo-warzywnego oraz produkcji pasz i karmy dla zwierząt.

Aktualny zakres certyfikacji NF VALIDATION obejmuje szeroką gamę produktów przeznaczonych do spożycia przez ludzi, karmę dla zwierząt domowych, pasze, próbki środowiska produkcyjnego oraz próbki związane z produkcją pierwotną.

Rodzaj podłoża, masa próbki, proporcja rozcieńczenia, temperatura i czas wzbogacania muszą być dobrane do konkretnej matrycy. Deklarowanego czasu 10–24 godzin nie należy traktować jako uniwersalnego dla wszystkich zastosowań.

Zasada działania real-time PCR

Przed analizą PCR próbka jest poddawana wzbogacaniu mikrobiologicznemu zgodnie z odpowiednim protokołem. Następnie komórki obecne w hodowli są lizowane, a przygotowany lizat przenoszony do probówki zawierającej wstępnie dozowane odczynniki PCR.

Podczas reakcji następuje amplifikacja sekwencji DNA swoistych dla Salmonella spp. Sondy znakowane fluorescencyjnie umożliwiają monitorowanie reakcji w czasie rzeczywistym. Równolegle amplifikowana jest wewnętrzna kontrola dodatnia IPC, wspierająca wykrywanie problemów z przebiegiem reakcji lub inhibicją.

Test nie określa liczby komórek ani nie identyfikuje konkretnego gatunku lub serowaru. Do różnicowania Salmonella Typhimurium i Salmonella Enteritidis przeznaczony jest odrębny test multiplex SureTect™.

Ogólny przebieg badania

1. Pobranie próbki: materiał należy pobrać aseptycznie, zgodnie z planem próbkowania i zatwierdzoną procedurą SOP.
2. Wzbogacanie: próbkę inkubuje się w odpowiednim podłożu, z uwzględnieniem rodzaju matrycy, masy próbki i zakresu wybranej walidacji.
3. Liza: część wzbogaconej hodowli przenosi się do probówki z odczynnikiem lizującym i proteinazą K.
4. Przygotowanie PCR: lizat przenosi się do probówki zawierającej odczynniki właściwe dla testu Salmonella spp.
5. Amplifikacja: reakcję przeprowadza się na kompatybilnym aparacie real-time PCR z odpowiednim plikiem testu.
6. Interpretacja: oprogramowanie analizuje sygnały celu i kontroli IPC oraz przedstawia wynik zgodnie z regułami przypisanymi do testu.
7. Potwierdzenie: wynik dodatni należy potwierdzić metodą przewidzianą w stosowanym, certyfikowanym protokole.

Powyższy opis przedstawia ogólny przebieg oznaczenia i nie zastępuje aktualnej instrukcji producenta.

Zawartość zestawu

• 12 pasków po 8 probówek z odczynnikiem Lysis Reagent 1,
• proteinaza K,
• 12 pasków po 8 probówek PCR z odczynnikami do wykrywania Salmonella spp.,
• przebijalne uszczelnienia do płytek 96-dołkowych,
• zatyczki do probówek PCR.

Podłoża do wzbogacania, suplementy, materiały do pobierania próbek, sprzęt do inkubacji oraz aparat PCR nie stanowią standardowej zawartości zestawu.

Wymagane wyposażenie i materiały

• podłoże i ewentualne suplementy odpowiednie dla badanej matrycy,
• inkubator mikrobiologiczny,
• pipety automatyczne, końcówki z filtrem oraz materiały jednorazowe,
• urządzenie przeznaczone do etapu lizy termicznej,
• QuantStudio™ 5 Food Safety Real-Time PCR System z RapidFinder™ Analysis Software w odpowiedniej wersji lub
• 7500 Fast Food Safety Real-Time PCR Instrument z RapidFinder™ Express Software w odpowiedniej wersji,
• właściwy plik testu i konfiguracja barwników,
• materiały kontroli jakości wymagane przez instrukcję i procedurę laboratorium.

Opcjonalna automatyzacja etapu lizy i przygotowania reakcji PCR jest możliwa przy użyciu odpowiednio skonfigurowanej platformy CyBio FeliX.

Interpretacja wyników

Wynik ujemny

Oznacza, że w przebadanej porcji wzbogaconej próbki nie wykryto docelowej sekwencji DNA Salmonella spp. Wynik jest ważny wyłącznie wtedy, gdy kontrola wewnętrzna i pozostałe kryteria przebiegu zostały zaakceptowane przez oprogramowanie.

Wynik dodatni

Wskazuje na domniemaną obecność Salmonella spp. Wynik dodatni należy potwierdzić zgodnie z właściwą metodą certyfikowaną, instrukcją producenta oraz wymaganiami laboratorium.

Wynik nieważny lub zahamowany

Może wskazywać między innymi na inhibicję PCR, nieprawidłowe przygotowanie próbki lub problem techniczny. Dalsze postępowanie, w tym ewentualne rozcieńczenie lizatu lub powtórzenie oznaczenia, powinno być zgodne z instrukcją testu.

Walidacje i certyfikaty

• NF VALIDATION™: certyfikat UNI 03/07-11/13, walidacja zgodna z ISO 16140-2:2016; aktualna ważność do 4 listopada 2029 r.
• Metoda referencyjna NF VALIDATION: EN ISO 6579-1:2017 wraz z A1:2020.
• MicroVal™: certyfikat 2022LR111 dla szerokiego zakresu żywności i próbek środowiskowych; aktualna ważność do 23 marca 2027 r.
• AOAC Performance Tested Methods℠: metoda 051303.
• AOAC Official Method℠: metoda 2021.02.

Zakresy matryc, wielkości porcji oraz procedury wzbogacania różnią się pomiędzy poszczególnymi certyfikatami. Laboratorium powinno stosować dokładnie ten wariant procedury, który odpowiada wybranej matrycy i podstawie raportowania wyniku.

Przechowywanie i kontrola jakości

Zestaw należy przechowywać w temperaturze 2–8°C, chroniąc go przed światłem. Przed otwarciem komponenty powinny osiągnąć temperaturę pokojową określoną w instrukcji. Nie należy używać odczynników po upływie terminu ważności ani w przypadku uszkodzenia opakowania lub niezachowania warunków przechowywania.

Kontrole zewnętrzne, częstość ich stosowania oraz kryteria akceptacji powinny wynikać z instrukcji producenta i zatwierdzonej procedury SOP. Kontrola IPC monitoruje przebieg reakcji PCR, ale nie zastępuje kontroli pobrania próbki, wzbogacania ani całego procesu analitycznego.

Stanowiska przygotowania próbek, przygotowania reakcji i analizy produktów amplifikacji należy organizować w sposób ograniczający ryzyko kontaminacji. Aparat PCR, pipety i urządzenia pomocnicze powinny być objęte właściwym nadzorem metrologicznym i serwisowym.

Ograniczenia i bezpieczne użytkowanie

• Test jest przeznaczony do profesjonalnych badań mikrobiologicznych żywności i środowiska, a nie do diagnostyki klinicznej człowieka lub zwierząt.
• Metoda ma charakter jakościowy i nie służy do oznaczania liczby komórek.
• Test wykrywa Salmonella spp., ale nie określa gatunku, serowaru ani pochodzenia wykrytego DNA.
• Wynik ujemny dotyczy wyłącznie przebadanej porcji i nie wyklucza nierównomiernego rozmieszczenia drobnoustrojów w partii.
• Hodowle po wzbogacaniu oraz zużyte materiały należy traktować jako potencjalnie niebezpieczne biologicznie.

FAQ - najczęściej zadawane pytania

Ile testów zawiera zestaw SureTect Salmonella Species PCR Assay?

Zestaw zawiera odczynniki do wykonania 96 reakcji, rozmieszczone w 12 paskach po 8 probówek.

Jakie próbki można badać testem?

Zakres NF VALIDATION obejmuje szeroką gamę żywności, karmę dla zwierząt domowych, pasze, próbki środowiska produkcyjnego oraz próbki produkcji pierwotnej. Dla każdej matrycy należy zastosować właściwy protokół wzbogacania.

Jak długo trwa uzyskanie wyniku?

Producent wskazuje, że w wybranych procedurach wynik może być dostępny w ciągu około 10–24 godzin. Pełny czas zależy jednak od matrycy, wielkości próbki i wymaganego okresu wzbogacania, który w niektórych protokołach może być dłuższy.

Czy test identyfikuje serowar Salmonella?

Nie. Test wykrywa Salmonella spp., ale nie różnicuje gatunków ani serowarów. Do równoczesnego wykrywania Salmonella spp. oraz różnicowania serowarów Typhimurium i Enteritidis służy odrębny test SureTect™ Multiplex.

Potrzebujesz pomocy w dobraniu idealnego produktu dla Twojego laboratorium? Informacje na ten temat znajdziesz tu:

Nie znalazłeś takiego produktu na BestLabs? Skontaktuj się z nami - specjaliści BestLabs na pewno znajdą odpowiedni dla Państwa produkt: